明暗箱(黑白箱,light/dark box)实验--研究焦虑动物模型的实验条件-秘密教学漫画榜漫画
探讨明暗箱实验(light/darkbox,LDB)作为昆明小鼠状态焦虑动物模型的影响因素。方法昆明小鼠(♂)进行LDB实验,实验参数有明区停留时间百分率(Ltime%)、明区水平运动百分率(Lcross%)、明区垂直运动百分率(Lrear%)、水平运动总得分(cross)、垂直运动总得分(rear)、总得分(total=cross+rear)、穿梭次数(transition)以及粪便总粒数(Fbs);考察因素有昼夜节律、光照面积、光照颜色、光照强度。
结果t检验提示,昼夜节律对LDB实验参数无明显影响,光照面积(l3/5,l2/5)可分别升高LDB实验参数Lcross%、Lrear%;析因设计ANOVA提示,昼夜节律对LDB实验参数无影响,而光照面积对LDB实验参数Ltime%、Lcross%、Lrear%有明显影响;单因素ANOVA提示,光照颜色对LDB实验参数rear、Fbs有明显影响,光照强度对LDB实验参数cross、total有明显影响;dunnettt检验提示,Yellow光照颜色可降低LDB实验参数rear,100w光照强度可降低LDB实验参数cross、total;kruskal-wallis检验提示,光照颜色和光照强度对Fbs无明显影响。结论LDB用于评价啮齿类焦虑、运动探索及情绪性相关行为,实验参数不受昼夜节律影响,而受光照面积、光照颜色、光照强度影响。
焦虑症是最常见的精神障碍,临床常与其他类精神障碍合并共存;2019年全球疾病负担研究发现,焦虑症是导致10~24岁青少年伤残调整生命年的第六位主要疾病。明暗箱实验(light/darkbox,LDB)是状态焦虑动物模型行为学评价的经典方法,广泛用于焦虑症发病机制与药物筛选研究;啮齿类实验动物LDB焦虑情绪主要是基于明暗光线刺激冲突产成,其行为模式受实验装置(形状、材质、尺寸等)、
实验动物(品系、年龄、性别等)及实验操作(起始位置、记录时间、重测测量及周期节律等)诸多因素影响。因此,本研究依据LDB作为状态焦虑动物模型的评价方法与原理,初步探讨昼夜节律、光照面积、光照颜色以及光照强度等因素对昆明小鼠LDB行为模式的影响,以期筛选出LDB作为状态焦虑动物模型评价方法的稳定实验条件。
明暗箱/黑白箱/light-dark box,XR-XB120,上海欣软1材料与方法
1.1实验动物
昆明小鼠,雄性(♂),由山东大学实验动物中心提供,许可证号:sYxk(鲁)20130001;室温(20±2)℃,黑暗12h(6:00~18:00)和光照12h(18:00~6:00)环境,自由进水饮食饲养;预适应环境1周后,选取体质量(20±2)g小鼠进入正式实验。
1.2实验装置
明暗箱(45cm×27cm×27cm),木质,包括3部分:大面积箱体(27cm×27cm×27cm),底部分成9个面积相等的方格(9cm×9cm);小面积箱体(18cm×27cm×27cm),底部分成6个面积相等的方格(9cm×9cm);两箱体隔板(可移动)之中央通道(7cm×7cm)。明箱区采用30w白灯泡离箱底40cm高处照明;暗箱区采用30w红灯泡(或其他实验彩色)离箱底40cm高处照明。
1.3实验操作
操作者将昆明小鼠置于大面积箱体正中央格,用摄像系统记录动物5min的行为变化,包括两箱停留时间、水平运动、垂直运动、穿梭次数以及粪便粒数;其中,四只爪子均进入一格方可记录水平运动1次,两前爪腾空或攀附墙壁方可记录垂直运动1次。纳入实验参数:明区停留时间百分率(Ltime%)、明区水平运动百分率(Lcross%)、明区垂直运动百分率(Lrear%)、水平运动总得分(cross)、垂直运动总得分(rear)、总得分(total=cross+rear)、穿梭次数(transition)和两区粪便粒数(lFbs,dFbs)及粪便总粒数(Fbs=lFbs+dFbs)
1.4实验条件
LDB实验条件影响因素主要考察昼夜节律(白天黑夜)、光照面积(明箱区)、光照颜色(暗箱区)、光照强度(明箱区)以及昼夜节律与光照面积交互效应。其中,昼夜节律主要考察白天周期(18:00~6:00;day)、黑夜周期(6:00~18:00;night)对实验动物LDB行为模式影响;光照面积主要考察眀箱区光照大面积箱体(l3/5)、小面积箱体(l2/5)对实验动物LDB行为模式影响;昼夜节律与光照面积采用析因设计分组:day-l3/5(n=6),day-l2/5(n=6),night-l3/5(n=6),night-l2/5(n=6)。光照颜色主要考察暗箱区光照颜色黄色(Yellow,n=6)、绿色(green,n=6)、蓝色(blue,n=6)、红色(red,n=6)对实验动物LDB行为模式影响,明箱区采用30w白灯泡光照;实验周期选取night。光照强度主要考察眀箱区光照强度15w(n=6)、25w(n=6)、40w(n=6)、60w(n=6)、100w(n=6)对实验动物LDB行为模式影响,暗箱区采用30w红灯泡光照;实验周期选取night。
1.5统计学分析采用spss13.0 进行统计分析,p<0.05表示差异有统计学意义。
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文章转于山东中医药大学王 群,马 飞等老师发表的《明暗箱实验:昆明小鼠状态焦虑动物模型实验条件筛选》,文章编号:1001-1978(2022)10-1597-04。